FHpure ®大肠杆菌裂解澄清试剂盒常见问题解答

FHpure^®大肠杆菌裂解澄清试剂盒是西安麦博泰克生物科技有限公司专利发明产品，主要针对使用大肠杆菌作为宿主生产基因工程蛋白过程中大肠杆菌菌体的裂解和裂解液的澄清过程。可以完全替代超声破碎法和高压匀浆法。

由裂解液，溶菌酶，全能核酸酶三部分组成，目前总有有四个规格，分别是1g*10次，5g*5次，10g*5次，1000g*1次。

理论上没有规模限制，建议最小处理量1g湿菌，最大不限。

无需购买超声破碎仪和高压均质机，仅需一台磁力搅拌器就可在10-60min内完成大肠杆菌的裂解和澄清过程。对于需要同时裂解澄清多个不同菌种的实验场景尤其适合。整个实验过程条件温和。

理论上是可行的，欢迎感兴趣的老师咨询试用。

简单到有手就行。1、称取湿菌；2、按比例加入裂解液搅拌均匀；3、加入溶菌酶继续搅拌至裂解液粘稠；4、加入全能核酸酶搅拌30min。

蛋白收率一致，有部分客户反馈蛋白收率更好。

对于实验室客户，FHpure^®大肠杆菌裂解澄清试剂盒处理1g湿菌的成本是进口同类产品的四分之一。对于需要处理1公斤以上湿菌的客户，每公斤成本在8000元人民币以内。

建议裂解液在阴凉避光处保存，有条件可以放在2-8℃保存；溶菌酶2-8℃保存，现用现配；全能核酸酶要求-20℃冷冻保存。

溶菌酶和全能核酸酶的最佳作用温度是37℃，实际使用过程建议温度控制在室温即可。温度敏感性蛋白可酌情采取控温措施，4-37℃之间均可。

取决于容器大小和裂解液的浓度。不建议太快，能保证充分混匀不产生大量泡沫即可。20ml烧杯10ml裂解液，推荐200rpm。

一般需要30-60min，我们裂解过最快的只需要5min。

整个裂解过程中，可以观察到菌液有一个明显的黏度变化过程，加入溶菌酶后搅拌一定时间，菌液迅速变黏，加入核酸酶继续搅拌，30min以后可观察到裂解液黏度降低，裂解完成（详情请点击以下视频观看）。

超过1小时以后，继续延长裂解时间裂解效率提升不明显。

提高裂解液比例会提高裂解效率，建议裂解液比例为1：5，1：7.5，1：10。

正常情况下1g湿菌加1mg溶菌酶即可，适当增加溶菌酶的加入量，裂解效率会有明显的提高。

培养基残留会影响酶活性，建议大肠杆菌裂解之前用超纯水悬浮（建议1：5（W：V））、离心收集沉淀后用大肠杆菌裂解澄清试剂盒裂解。

裂解后样品pH在8.0-8.5之间，电导1.0-2.0ms/cm。

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